手术室的温、湿度主要考虑手术切口的感染率和愈合率。手术时医护人员高度紧张，工作强度较大，当温度下降到小于25℃，才能有效降低医护人员的发菌量，因此上限温度设定在25℃。而冬季为减少患者身体外露部分的热损失，最低温度设定在21℃。尤其是进行大手术时，更必须保持在大于21℃，否则在很长的手术时间内，裸露的皮肤热损失很大，加上皮肤上的消毒剂的蒸发会吸收大量的热量，易使病人发生低温机能性障碍。其他辅助用房则考虑人的舒适性，把温度上下限放宽到21～27℃。同样，考虑手术的特殊性，相对湿度不宜定得太高，否则医护人员会感到气闷，皮肤发湿，发菌量增加。另外，当相对湿度大于65％时，也易使细菌繁殖，器械锈蚀。但湿度过低，手术切口的水分散发过快，不易愈合，静电不易消除，有时甚至引起麻醉气体的爆炸。因此相对湿度设定在50％～60％，其他辅助用房放宽到45％～65％。